Commentaire: Trop de stimulation… dans ce cas avec l'amphétamine, qui inonde les récepteurs de la dopamine [D1]… altère la liaison des paires chez les campagnols monogames.
Edité par Leslie Lars Iversen, Université d'Oxford, Oxford, Royaume-Uni, et approuvé le 10 décembre 2009 (reçu pour examen le 21 octobre 2009)
Abstract
Le campagnol des prairies (Microtus ochrogastre) est une espèce de rongeur socialement monogame qui forme des liens de paire après l’accouplement, un comportement dans lequel la dopamine centrale (DA) a été impliquée. Ici, nous avons utilisé des campagnols mâles des Prairies pour examiner les effets de l’exposition au médicament sur la liaison de paires et les circuits neuronaux associés. Dans notre première expérience, le comportement motivé par l'amphétamine (AMPH) a été examiné à l'aide d'un paradigme de préférence de place conditionnée (CPP) et s'est révélé médié par l'activation de récepteurs DA de type D1. Ensuite, nous avons examiné les effets d'une exposition répétée à l'AMPH sur la liaison de paires. Les mâles témoins intacts et prétraités avec une solution saline manifestaient des préférences de partenaire induites par l'accouplement, alors que les mâles prétraités avec AMPH aux doses efficaces pour induire une PPC ne présentaient pas de préférences de partenaires induits par l'accouplement. Un tel traitement à l'AMPH a également amélioré l'expression du récepteur D1, mais pas D2, DA dans le noyau accumbens (NAcc). En outre, le blocage pharmacologique des récepteurs DA de type D1 chez le NAcc sauvé des préférences de partenaire induites par l'accouplement chez les mâles traités à l'AMPH. Ensemble, nos données indiquent qu'une exposition répétée à l'AMPH peut réduire le répertoire comportemental des campagnols mâles des prairies via un mécanisme spécifique du récepteur DA dans le NAcc, entraînant une altération de la formation de liaisons de paires.
Il est largement admis que les comportements motivés et émotionnels qui favorisent la condition physique sont régulés par des circuits de récompense du cerveau, notamment le système de dopamine mésolimbique (DA) (1, 2). Bien que ce système soit souvent impliqué dans la consommation de nourriture et le comportement sexuel (3, 4), il a également été impliqué dans d’autres comportements motivés naturels, tels que le jeu social entre juvéniles et le lien social entre parent et progéniture (5-9). Les liens sociaux formés entre les partenaires adultes, c’est-à-dire les liens de couple, sont souvent sous-représentés dans la recherche. Une étude récente utilisant une espèce de rongeur socialement monogame, le campagnol des prairies (Microtus ochrogastre) (10-12), indiquent qu'une grande partie de la régulation neuronale sous-jacente à la formation et au maintien des liaisons de paires se produit dans le noyau accumbens (NAcc) (NACC) (13-15) —Une région cérébrale mésolimbique essentielle à la médiation de comportements motivés (1, 2, 16).
Bien que les circuits de motivation aient évolué pour promouvoir des comportements favorisant la condition physique, tels que l’alimentation, l’accouplement et les liens sociaux (1, 17), il est vulnérable à l’usurpation artificielle liée à l’abus de drogues (8). Par exemple, l’administration de drogues psychostimulantes, telles que la cocaïne et l’amphétamine (AMPH), entraîne des modifications persistantes de l’activité de la DA mésolimbique (18, 19). L’impact intense de ces drogues et d’autres drogues addictives sur ce circuit a été suggéré pour diminuer la valeur perçue des incitations naturelles (20), y compris ceux de nature sociale (8). Bien que l’on sache que les toxicomanes ont un comportement social altéré (21), la régulation neuronale des interactions entre l'expérience de la drogue et l'attachement social est mal comprise. En effet, ces interactions sont en partie difficiles à modéliser chez des rongeurs de laboratoire traditionnels ne présentant pas de lien social entre congénères adultes.
La neurobiologie de cet attachement social, en particulier les liens de couple entre adultes, a été étudiée de manière approfondie chez le campagnol des prairies (10-12), et récemment, cette espèce a été établie comme modèle viable pour examiner la valeur motivationnelle de l’AMPH (22). De plus, la formation des liaisons de paires et le renforcement de l'AMPH sont médiés, au moins en partie, par la transmission de DA dans le NAcc (14, 15, 23). Par conséquent, la présente étude a utilisé le modèle du campagnol des Prairies pour établir un test comportemental afin d'étudier les effets de l'exposition au médicament sur le lien social et s'est concentrée sur le système de signalisation NAcc DA pour révéler un mécanisme neuronal sous-tendant ces effets comportementaux.
Résultats
La préférence de place conditionnée induite par AMPH (CPP) est médiée par l'AD de manière spécifique au récepteur.
La formation d'un CPP a été définie par une augmentation significative du temps passé dans la cage appariée à l'AMPH pendant le post-test, après le nombre de jours 3 de conditionnement par l'AMPH, par rapport au prétest. Ni les injections salines ni les solutions salines contenant les deux doses les plus faibles d’AMPH testées (0.1 et 0.5 en mg / kg) ne modifiaient les préférences de la cage (Fig. 1A). Cependant, les hommes conditionnés avec des doses plus élevées d'AMPH, y compris 1.0 (t = 2.87, P <0.01), 3.0 (t = 3.63, P <0.01) ou 5.0 mg / kg (t = 3.03, P <0.01), CPP affiché (Fig. 1A).
Figue. 1.
(A) Les hommes qui ont reçu des injections ip de solution saline ou les faibles doses d'AMPH (0.1 ou 0.5 mg / kg) pendant 3 jours de conditionnement n'ont pas montré de CPP. Cependant, les mâles conditionnés avec AMPH à des doses plus élevées (1.0, 3.0 et 5.0 mg / kg) ont passé beaucoup plus de temps dans la cage conditionnée pendant le post-test que le pré-test. (B) Pour tester le rôle des récepteurs DA dans la CPP induite par AMPH, les mâles ont été prétraités avec une solution saline ou différentes doses d'un antagoniste des récepteurs DA non sélectif (halopéridol), un antagoniste des récepteurs de type D1 (SCH23390) ou un antagoniste des récepteurs de type D2 (éticlopride). ) avant les injections d'AMPH pendant 3 jours de conditionnement. Les injections de solution saline ou de faibles doses d'halopéridol n'ont pas modifié la CPP induite par l'AMPH. Cependant, l'halopéridol injecté à 5.0 mg / kg a bloqué la CPP induite par AMPH, démontrant une implication des récepteurs DA dans la CPP induite par AMPH. En outre, des injections de l'antagoniste de type D1 à la fois aux doses faibles et élevées, mais pas à l'antagoniste de type D2, ont bloqué la CPP induite par l'AMPH, démontrant une régulation DA spécifique au récepteur de la CPP induite par l'AMPH. *P <0.05, **P <0.01.
Comme l’AMPH augmente considérablement la neurotransmission de la DA chez les campagnols des prairies (24) et DA médie le renforcement de l'AMPH chez d'autres espèces (23), nous avons ensuite examiné la régulation des récepteurs DA (DAR) du CPP induit par l’AMPH chez les campagnols des prairies mâles. Les sujets ont été prétestés dans le paradigme du PPC, traités avec une solution saline ou une solution saline contenant différentes doses de l'antagoniste non sélectif du DAR (halopéridol) avant les injections d'AMPH (1.0 mg / kg) pendant les jours de conditionnement 3, puis testés pour le PPC après un test. Sujets traités avec une solution saline (t= 2.69, P <0.01) ou une solution saline contenant les deux doses les plus faibles d'halopéridol (0.1 mg / kg; t = 3.62, P <0.01; 1.0 mg / kg; t = 3.89, P <0.01) avant le conditionnement de l'AMPH présentait la CPP induite par l'AMP, tandis que l'halopéridol à 5.0 mg / kg bloquait la CPP induite par l'AMPH, montrant l'implication des DAR dans les effets comportementaux de l'AMP (Fig. 1B). Pour déterminer quel sous-type de DAR intervient dans la CPP induite par l'AMPH, nous avons ensuite administré un antagoniste spécifique de type D1 (SCH23390) ou un antagoniste spécifique de type D2 (éticlopride) avant les injections d'AMPH pendant le conditionnement. L’antagonisme de type D2 n’a pas bloqué la CPP induite par l’AMPH (t = 3.15, P <0.01 pour 0.5 mg / kg et t = 2.60, P <0.05 pour 5.0 mg / kg d'éticlopride) mais le blocage des récepteurs de type D1 a éliminé la CPP induite par l'AMP (Fig. 1B), démontrant que la CPP induite par l’AMPH est médiée par l’activation de récepteurs analogues à D1, mais non analogues à D2, chez les campagnols des prairies mâles.
L'expérience AMPH modifie la formation de préférences de partenaires induites par l'accouplement.
Bien que le CPP induit par l’AMPH ait nécessité l’activation de récepteurs de type D1 (Fig. 1B), nous avons déjà montré que l’activation de récepteurs de type D1 empêche la formation de liaisons de paires induites par l’accouplement (14). Par conséquent, nous avons émis l’hypothèse que le prétraitement AMPH interférerait avec la liaison induite par l’accouplement chez les campagnols mâles des prairies. Les mâles ont été divisés en quatre groupes n'ayant reçu aucune injection (intacte), injection de solution saline ou d'injection de 1.0 ou de 5.0 en mg / kg AMPH pendant 3 jours (un paradigme d'injection suffisant pour induire une CPP). Le quatrième jour, tous les hommes ont été jumelés avec une femme sexuellement réceptive à 24 h, puis testés pour déterminer les préférences du partenaire. Conforme aux études précédentes (14, 25-27), les mâles intacts et les mâles ayant reçu des injections de solution saline pendant les 3 jours avant l’accouplement ont montré des préférences de partenaire induites par l’accouplement (mâles intacts; t = 3.05, P <0.01, mâles injectés de solution saline; t = 3.21, P <0.01; Fig. 2A). Cependant, les mâles qui ont été prétraités avec l'une ou l'autre dose d'AMPH pendant 3 jours avant l'accouplement n'ont pas montré les préférences de leur partenaire (Fig. 2A). Il est important de noter que le prétraitement AMPH n’a pas affecté la fréquence d’accouplement pendant la période de cohabitation (F(3, 26) = 0.26, P = 0.85; Fig. 2B) ou d’activité locomotrice lors du test de préférence du partenaire (F(3, 26)= 2.34, P = 0.10; Fig. 2C), indiquant qu'AMPH interférait directement avec les préférences du partenaire induites par l'accouplement.
Figue. 2.
(A) Après 24 heures d'accouplement, les mâles intacts ont affiché les préférences de leur partenaire en passant beaucoup plus de temps en contact côte à côte avec un compagnon familier qu'avec une étrange femelle. Cette préférence de partenaire induite par l'accouplement a également été affichée par les mâles qui ont reçu 3 jours de prétraitement avec une solution saline. Cependant, 3 jours de prétraitement avec AMPH à 1.0 ou 5.0 mg / kg (doses d'AMPH qui ont induit la CPP) ont bloqué les préférences du partenaire induites par l'accouplement. Aucune différence de groupe n'a été trouvée dans la fréquence des accouplements pendant les 6 premières heures de l'accouplement (B) ou du nombre de passages de cages lors du test de préférence du partenaire (C). **P <0.01.
L'expérience AMPH élève les récepteurs D1 dans les pays nord-américains.
Étant donné que les préférences du partenaire et les CPP induits par AMPH (voir ci-dessus) et la liaison par paire ont été altérés avant exposition par AMPH (14) sont réglementés par NAcc DA, nous avons émis l’hypothèse que l’AMPH modifierait de manière significative le circuit DA mésolimbique chez les campagnols des prairies mâles. Les cerveaux des sujets de l'expérience comportementale susmentionnée ont été traités pour le marquage in situ d'ARNm de marqueurs DA. Les mâles traités avec AMPH (1.0 mg / kg) ont présenté une augmentation significative du récepteur D1 (D1R; t = 3.06, P <0.01), mais pas le récepteur D2 (D2R), marquage de l'ARNm dans le NAcc, par rapport aux hommes recevant un prétraitement salin (Fig. 3 A-C). Cependant, aucune différence de groupe n'a été trouvée dans la densité du marquage de l'ARNm pour la tyrosine hydroxylase (TH), le transporteur DA (DAT) ou les D2R dans la zone tegmentale ventrale (VTA) - la région du cerveau qui fournit l'entrée dopaminergique primaire au NAcc (Fig. 3 D-G). L’expression accrue de D1R dans le NAcc a également été confirmée par Western blot (t = 1.90, P <0.05; Fig. 3 H ainsi que I). Ensemble, ces données indiquent que l'exposition à l'AMPH a des effets spécifiques du récepteur et du site sur le système DA mésolimbique des campagnols des Prairies - augmentant le niveau de D1R dans le NAcc.
Figue. 3.
Images photographiques montrant l'étiquetage in situ de D1R (A) et D2R (B) ARNm dans le NAcc et le putamen caudé (CP) de campagnols des prairies mâles qui ont reçu des injections ip de solution saline ou d'AMPH (1.0 mg / kg) pendant 3 jours. Le traitement par AMPH a augmenté de manière significative la densité de l'ARNm de D1R, mais pas de D2R, dans le NAcc. Étant donné que cette augmentation était équivalente dans le noyau et le shell NAcc, les données ont été regroupées entre les sous-régions (C). Images photographiques illustrant le marquage de l'ARNm de la tyrosine TH (D), DAT (E) et D2R (F) dans la VTA du cerveau du campagnol des prairies. Le traitement AMPH n'a pas affecté la densité de ces ARNm marqueurs DA dans le VTA (G). Dans le NAcc, le traitement par AMPH a augmenté de manière significative la densité protéique des D1R, mais pas des D2R, telle que mesurée par Western blot (H ainsi que I). *P <0.05, **P <0.01. (Barre d'échelle, 1 mm.)
Récepteurs D1 dans le Centre Média NAcc Affaiblissement AMPH des préférences du partenaire.
Nous avons déjà montré que, chez les mâles des prairies mâles, l’activation de D1R au sein du NAcc empêchait la formation de préférences de partenaires (14), et la présente étude démontre que l'exposition à l'AMPH régule à la hausse les D1R dans le NAcc (Fig. 3). Par conséquent, nous avons testé l'hypothèse selon laquelle la dégradation des préférences du partenaire induite par AMPH est médiée par les D1R au sein du NAcc. Les mâles ont reçu une cannulation stéréotaxique dirigée bilatéralement vers la coquille de NACC (Fig. 4A). Le liquide céphalo-rachidien artificiel (LCR) seul ou contenant des doses différentes de l'antagoniste du récepteur de type D1, SCH23390, à des doses différentes, a été injecté dans le NAcc avant les injections d'AMPH (1.0 en mg / kg) pendant les jours de conditionnement 3. Par la suite, les sujets ont été jumelés à une femme pour 24 h, puis testés pour déterminer les préférences du partenaire. Comme dans l'expérience ci-dessus (Fig. 2), L'exposition à l'AMPH empêchait les préférences du partenaire induites par l'accouplement chez les mâles ayant reçu une injection intra-NACC de LCR ou une faible dose de SCH23390 (Fig. 4B). Cependant, les hommes auxquels une forte dose de SCH23390 a été injectée (100 ng / kg) ont affiché les préférences de leur partenaire (t= 2.55, P <0.05), indiquant que le blocage du D1R dans le NAcc a éliminé l'altération induite par l'AMPH de la formation des préférences du partenaire (Fig. 4B). Aucune différence de groupe n'a été trouvée dans la fréquence d'accouplement lors de la cohabitation ou de l'activité locomotrice lors du test de préférence du partenaire.
Figue. 4.
(A) Une photo et un schéma illustrant le site d’injection dans le CNRC du cerveau de campagnol mâle des Prairies. Nous nous sommes concentrés sur le shell NAcc car cette sous-région spécifique médiatise les préférences des partenaires induites par l'accouplement. (B) Les hommes qui ont reçu des injections intra-NAcc de LCR ou une faible dose d'antagoniste du récepteur D1 (SCH23390; 0.4 ng / côté) avant les injections d'AMPH présentaient une altération de l'AMPH des préférences du partenaire. Cependant, des injections intra-NAcc d'une dose élevée de SCH23390 (100 ng / côté) ont sauvé les préférences des partenaires induits par l'accouplement chez les mâles traités par AMPH. *P <0.05.
a lieu
Dans cette étude, nous reproduisons notre découverte précédente selon laquelle l'exposition à l'AMPH induit le CPP chez les campagnols mâles des prairies (22) et démontrent que l’activation de D1R dans le NAcc est nécessaire à ce comportement, résultat conforme aux études menées chez d’autres espèces de rongeurs (28). Cette découverte, ainsi que des études antérieures, suggèrent que des mécanismes DAergiques distincts dans le CNRS régulent les comportements motivés par l'AMPH et par les partenaires: le comportement motivé par l'AMPH (CPP) est véhiculé par D1R, alors que le comportement motivé par le partenaire (préférences du partenaire) est facilité par D2R l’activation et inhibé par l’activation de D1R au sein du NAcc (13-15). [Il est important de noter que, dans le NAcc, l’activation de D2R intervient dans certaines conditions du CPP induit par un médicament dans certaines conditions (29) et l’activation de D1R est impliquée dans d’autres comportements à caractère social, tels que ceux dirigés vers la progéniture (7, 30)].
La régulation DAergic différentielle de la formation du CPP et des préférences du partenaire est très probablement obtenue par des différences dans le degré de concentration en DA évoquée par un stimulus activant différents sous-types de DAR. En raison des différences d'affinité de liaison, une forte augmentation de la concentration de DA est nécessaire pour activer les D1R de faible affinité, tandis qu'une augmentation modeste des concentrations de DA active de préférence les D2R de haute affinité (31). Chez les campagnols des prairies, l’AMPM provoque une augmentation beaucoup plus importante de la concentration de DA (24) comparé à celui évoqué par l'accouplement (15, 25). Ces données suggèrent que des augmentations relativement modestes de la concentration en AD au cours des interactions sociales (15, 25) permettent l’activation spécifique de D2R à haute affinité et facilitent ainsi la formation de liaisons de paires. Inversement, une augmentation robuste de la concentration en DA après l'administration d'AMPH est probablement suffisante pour activer les D1R de faible affinité, facilitant ainsi le CPP induit par l'AMPH.
La régulation comportementale spécifique du récepteur par la DA est cohérente avec les études électrophysiologiques extracellulaires chez des rats en mouvement, montrant que les stimuli naturels et le médicament sont traités par des populations neuronales distinctes au sein du NAcc (32). Bien que de telles études électrophysiologiques ne permettent pas d’identifier le sous-type de récepteurs DA exprimés sur des neurones individuels, des études anatomiques démontrent que le NAcc est composé de neurones de projection exprimant des D1R ou des D2R avec très peu de coexpression (33). Les psychostimulants activent de préférence les voies de signalisation intracellulaires en aval des D1R (comme déterminé par une phosphorylation accrue des molécules de signalisation) (34) et nous avons montré précédemment que l’activation accrue de ces voies de signalisation empêche la formation de préférences de partenaires (35). Ainsi, bien que la transmission de l'AD au sein du CNRC joue un rôle important dans la réponse à l'AMPH et la formation des préférences du partenaire, ces comportements sont probablement médiés par des microcircuits distincts comprenant des systèmes de projection striataux (33, 36). Ceci est particulièrement intéressant car la formation de liaisons de paires est médiée par l’activation de neurones exprimant D2R qui se projettent préférentiellement vers le pallidum ventral (33), une autre région du cerveau importante pour la liaison de paires (26).
Dans cette étude, nous apportons la preuve que l'expérience AMPH empêche la liaison induite par l'appariement. Comme les tests de préférence des partenaires dans ces expériences ont été réalisés 48 h après la dernière exposition à l’AMPH (c’est-à-dire une fois le médicament complètement métabolisé), ces données suggèrent un effet persistant de l’AMPH sur le lien social. Un mécanisme potentiel, compatible avec les effets de l'AMPH chez d'autres espèces (37, 38), par lequel AMPH peut altérer la liaison de paires, est due à l’augmentation de l’expression de D1R dans le NAcc. Cette notion est corroborée par le rôle antagoniste des D1R NAcc dans la formation des préférences des partenaires (14, 24) et par les données actuelles démontrant le sauvetage de la préférence du partenaire induit par l'accouplement par le blocage intra-NAcc D1R chez les animaux traités à l'AMPH (Fig. 4). Il est intéressant de noter que nous avons déjà montré que, chez les mâles des prairies, la régulation à la hausse des D1R de NAcc après des semaines de liaison de 2 pendant plusieurs semaines facilite l’agression sélective envers des étrangers conspécifiques, y compris les femelles sexuellement réceptives, ce qui suggère que cette plasticité neurale est un mécanisme évolué par lequel les voles mâles maintenir les liens de paire déjà établis (14). L'étude actuelle suggère que l'AMPH déclenche artificiellement cette neuroplasticité, conduisant à une altération de la liaison des paires par l'AMPH. Il est également possible que les hommes traités à l'AMPH associent la femme à un état aversif de sevrage de l'AMPH, et donc cette association négative pourrait sous-tendre la dégradation par l'AMPH de la liaison de paires. Une étude antérieure avait montré que l'abandon d'un comportement sexuel avec facultés affaiblies par la d-amphétamine chez le rat mâle39). Dans notre étude, cependant, les campagnols de groupes de traitement différents ont présenté des périodes d'accouplement similaires (Fig. 2B), indiquant qu'ils n'étaient probablement pas en état d'abandonner l'amphétamine. Néanmoins, cette possibilité mérite une enquête plus approfondie.
Il est bien établi que la plasticité neuronale induite par la drogue est fondamentale pour la toxicomanie (40). Les psychostimulants modifient considérablement la plasticité structurelle du système DA mésolimbique (41) et il existe des preuves suggérant que de tels changements sont plus durables dans les neurones exprimant D1 (37). De plus, des études électrophysiologiques ont montré que l’expérience de la cocaïne peut réduire la neuroplasticité subséquente au sein du NAcc (42). En effet, la réorganisation neuronale induite par le médicament du NAcc atténue la réorganisation neuronale naturelle résultant d'une nouvelle exposition à des environnements complexes (43). Par conséquent, bien que la toxicomanie soit largement reconnue comme un trouble de l’apprentissage et de la mémoire (1, 40, 44), il est souvent sous-estimé qu'une perte du potentiel d'altération supplémentaire dans les circuits mésolimbiques induite par le médicament peut également être essentielle pour la dépendance. Une telle réduction de la plasticité peut limiter un répertoire comportemental à la recherche de drogue. Il n’est donc pas surprenant que les campagnols traités à l’AMPH aient démontré un comportement de liaison réduit des paires. Les effets actuels de l'exposition à l'AMPH sur la liaison de paires sont cohérents avec des études antérieures illustrant les effets délétères des psychostimulants sur d'autres comportements sociaux, y compris le comportement de la mère (45-47) et le jeu social (48-50). Ensemble, ces travaux offrent la promesse que l’examen de la manière dont les drogues et les stimuli sociaux interagissent dans le cerveau pourrait permettre de mieux comprendre les interactions fortes qui existent entre le comportement social et la consommation de drogues chez l’homme (21).
Matériels et méthodes
Assujettir.
Les sujets étaient des campagnols mâles naïfs sur le plan sexuel, issus d'une colonie de reproduction en laboratoire. Les sujets ont été sevrés à l'âge de quelques jours 21 et logés dans des cages en plastique (12 × 28 × 16 cm), dans des cages en plastique (14 × 10 cm), où de l'eau et de la nourriture étaient fournies à volonté. Toutes les cages ont été maintenues selon un cycle lumière-obscurité 20: 90 et la température était d'environ XNUMX ° C. Tous les sujets étaient âgés d’environ XNUMX au moment des tests. La cannulation stéréotaxique et la perfusion spécifique de médicaments à base de DA ont été décrites en détail ailleurs (14).
Tests comportementaux.
Les tests de CPP ont été effectués comme décrit précédemment (22) avec les exceptions suivantes. La préférence de cage initiale pour chaque sujet a été déterminée dans un prétest de 30-min le jour 1. Les sujets ont ensuite été conditionnés, au cours des séances min 40, avec AMPH dans la cage non préférée et du sérum physiologique dans la cage préférée (les injections d’AMPH et de solution saline ont été administrées le même jour, 6 h les unes des autres) pendant 3 (jours 2 – 4). Ensuite, les sujets ont été testés (post-test) pour la présence d'un CPP le jour 5.
Le test de préférence du partenaire a été effectué comme décrit précédemment (14). En bref, l'appareil de test consistait en une cage centrale (12 × 28 × 16 cm) reliée par des tubes creux (7.5 × 16 cm) à deux cages identiques parallèles abritant chacune un animal stimulant. Les animaux stimulants étaient le «partenaire» familier (la partenaire du sujet) et un «inconnu» inconnu (une femme qui n'avait jamais rencontré le sujet auparavant) qui étaient attachés de manière lâche dans leurs cages séparées sans contact direct les uns avec les autres. Au début du test 3-h, les sujets ont été placés dans la cage centrale et autorisés à se déplacer librement dans l’appareil. Le comportement a été enregistré en utilisant un système d'enregistrement vidéo time-lapse. Les expérimentateurs aveugles à la manipulation ont examiné la bande et enregistré le comportement du sujet. Une préférence de partenaire a été définie comme le sujet passant beaucoup plus de temps en contact côte à côte avec le partenaire que l'inconnu, comme l'indique un échantillon apparié t test (27).
Hybridation in situ et immunoblot Western.
Ribosondes antisens spécifiques (Tableau 1) ont été utilisés pour le marquage in situ des ARNm D1R, D2R, TH et DAT. L'étiquetage a été réalisé avec 35Les sondes marquées S et les contrôles d’ARNm de détection pour chaque marqueur DA tel que décrit précédemment (51). Pour l’analyse par Western blot, la protéine DAR a été extraite du surnageant de poinçons tissulaires NAcc et dosée comme décrit précédemment (52).
Tableau 1.
Sondes d'ADNc pour le marquage d'un ARN marqueur dans le cerveau de campagnol des Prairies
Quantification et analyse des données.
Les préférences du RPC et du partenaire ont été déterminées par des échantillons appariés t tests. Les différences entre les groupes lors des accouplements au cours du premier 6 h d'appariement avec une femelle et des entrées de cage au cours du test de préférence du partenaire ont été analysées par ANOVA. Les densités optiques des marquages des ARNm D1R et D2R dans le NAcc ainsi que du marquage des ARNm TH, DAT et D2R dans le VTA ont été quantifiées à partir d'autoradiogrammes en utilisant un programme d'image informatisé (NIH IMAGE 1.64). Les données ont été présentées sous forme de pourcentage de variation de la moyenne du groupe de contrôle salin et les différences de groupe ont été analysées par t tests. Enfin, les densités optiques des marquages D1R et D2R sur le film radiographique issu des expériences de Western blotting ont été analysées par tDes tests.
Conception expérimentale.
L'expérience 1a a établi une courbe dose-réponse pour le CPP induit par l'AMPH. Les sujets ont été pré-testés dans l’appareil CPP le jour 1, répartis aléatoirement dans l’un des six groupes expérimentaux ayant reçu des injections ip (ip) de solution saline contenant différentes concentrations d’AMPH [0 (n = 12), 0.1 (n = 8), 0.5 (n = 9), 1.0 (n = 12), 3.0 (n = 12) ou 5.0 mg / kg (n = 13)] pendant les jours 3 (jour 2 – 4) de conditionnement, puis testé pour la CPP dans un post-test le jour 5.
L'expérience 1b a révélé le rôle des récepteurs DA dans la CPP induite par l'AMPH. Les sujets ont été pré-testés dans l’appareil CPP et répartis aléatoirement dans l’un des huit groupes expérimentaux ayant reçu une injection sc (sc) de solution saline (n = 10) ou une solution saline contenant différentes concentrations d'un antagoniste non sélectif des récepteurs DA [halopéridol; 0.1 (n = 8), 1.0 (n = 8) ou 5.0mg / kg (n = 8)], ou un type spécifique à D1 (SCH23390; 0.5 (n = 7) ou 5.0 mg / kg (n = 7)] ou antagoniste du récepteur DA spécifique de type D2 [eticlopride; 0.5 (n = 8) ou 5.0 mg / kg (n = 8)]. Trente minutes plus tard, une dose seuil d'AMPH (1.0mg / kg), qui a induit la CPP dans l'expérience 1a, a été utilisée pour le conditionnement de l'AMPH. Après 3 jours de conditionnement AMPH, tous les sujets ont reçu un post-test CPP.
Expérience 2 a examiné si l'expérience AMPH interférait avec la liaison de paires. Les sujets ont été répartis au hasard dans l’un des trois groupes expérimentaux ayant reçu des injections intraveineuses de solution saline (n = 8) ou une solution saline contenant 1.0 mg / kg (n = 8) ou 5.0 mg / kg (n = 7) AMPH une fois par jour pendant 3 jours consécutifs - un paradigme qui a induit la CPP chez les campagnols mâles des prairies. Le quatrième jour, les sujets ont été jumelés à une femme sensibilisée aux œstrogènes pour 24 h (14) et ont ensuite été testés dans un test de préférence du partenaire 3-h. Pour contrôler les effets potentiels des injections sur la liaison de paires, un quatrième groupe expérimental d'hommes intacts n'ayant reçu aucune injection (n = 6) a été couplé à des femelles sensibilisées aux œstrogènes pour 24 h, puis testé pour déterminer les préférences du partenaire. Tous les tests de comportement ont été enregistrés sur vidéo pour la vérification de l'accouplement. La durée des contacts côte à côte entre le sujet et l’étranger a été quantifiée. En outre, les fréquences des accouplements au cours du premier 6 h d'appariement et de l'activité locomotrice (indiquée par le franchissement de cage) au cours du test de préférence du partenaire 3-h ont été quantifiées. Après le test de préférence du partenaire, les sujets ont été immédiatement tués. Tous les cerveaux ont été récoltés, congelés sur de la neige carbonique et stockés à -80 ° C pour le marquage par hybridation in situ des ARNm de marqueurs DA.
L'expérience 3 a examiné si la liaison de paires altérée par AMPH était associée à des modifications de l'activité DA mésolimbique. Les cerveaux des sujets ayant reçu une solution saline (n = 8) ou 1.0 mg / kg AMPH (n = 8) dans l’expérience 2 ont été découpés sur un cryostat en coupes coronales (épaisseur 14 μm) montées au dégel sur des lames Superfrost / plus (Fisher Scientific). Des coupes de cerveau à des intervalles de 98-µm ont été traitées pour le marquage par hybridation in situ des ARNm D1R, D2R, TH et DAT. Etant donné que les campes expérimentés avec 1.0 mg / kg AMPH ont montré une augmentation de D1R, mais pas de D2R, marquage des ARNm dans le NAcc, par rapport aux témoins injectés avec une solution saline, deux autres groupes de sujets recevant des injections de solution saline (n = 6) ou 1.0 mg / kg AMPH (n = 6), 24 h d'accouplement, puis test des préférences du partenaire, comme décrit ci-dessus. Les sujets ont été décapités et les cerveaux ont été tranchés sur un cryostat à une épaisseur de 300 µm. Les poinçons tissulaires prélevés bilatéralement dans le NAcc ont été traités pour le blotting Western D1R et D2R.
L'expérience 4 a examiné si l'activation des récepteurs de type D1 dans le NAcc était responsable de la dégradation de la liaison de paires par l'AMPH. Les sujets ont été implantés avec des canules de guidage bilatérales dirigées vers la coquille de NAcc. Après des jours de récupération 3, ils ont été répartis au hasard dans l’un des trois groupes expérimentaux au cours desquels ils ont reçu des injections intra-NAcc de LCR (200 nL / side, n = 11) ou le fichier CSF contenant 0.4 (n = 6) ou 100 ng / side (n = 7) SCH23390. Trente minutes plus tard, ils ont reçu des injections ip de 1.0 mg / kg AMPH. Cette procédure a été répétée pendant 3 jours consécutifs. Le quatrième jour, les sujets ont été associés à une femme amorcée aux œstrogènes pour 24 h, puis testés pour déterminer les préférences de leur partenaire.