ifihan

Dopamine ṣe ipa pataki ninu ilana ti ihuwasi ibalopọ ọkunrin (Hull ati Dominguez, 2015). Wo, fun apẹẹrẹ, awọn ijabọ iṣaaju ti n fihan pe iṣakoso eto L-DOPA ni abajade ni nọmba ti o pọ julọ ti awọn eku ti n ṣafihan iṣẹ ṣiṣe ibalopọ (Da Prada et al., 1973; Paglietti et al., 1978). Isakoso ti apomorphine, agonist olugba olugba D1/D2 dopamine, tun ṣe abajade ni awọn eku ti o nilo akoko diẹ lati de ejaculation ati ipin ti o tobi julọ ninu wọn ni iyọrisi awọn ejaculations (Paglietti et al., 1978). Ni afikun si imudara awọn abala ijẹẹmu ti ihuwasi, awọn agonists dopamine ṣe alekun awọn okó psychogenic ati iwuri ibalopọ. Awọn ẹranko ti n gba awọn agonists olugba D2/D3 DA yiyan, 7-OH-DPAT tabi B-HT 920, ṣe afihan nọmba ti o tobi julọ ti awọn okó psychogenic ni iwaju obinrin estrous ti ko wọle nigbati akawe pẹlu awọn eku gbigba iṣakoso ọkọ (Ferrari et al., 2002). Lakoko ti awọn agonists dẹrọ ihuwasi ibalopo, awọn antagonists han lati bajẹ ihuwasi. Fun apẹẹrẹ, iṣakoso ti D2-receptor antagonist haloperidol dinku nọmba awọn agbeko, intromissions, ati ejaculations, ati pe o pọ si ati awọn lairi intromission ninu awọn eku (Pfaus ati Phillips, 1989). Isakoso ti awọn antagonists dopamine tun ṣe idiwọ ihuwasi ibalopọ ifojusọna, bi awọn eku ọkunrin ti o ni iriri ibalopọ ti n gba awọn oogun ṣe afihan awọn ayipada ipele ifojusọna diẹ, ṣaaju iṣafihan obinrin ti o gba ibalopọ (Pfaus ati Phillips, 1991) ni iyẹwu bilevel ti a lo bi idanwo ti iwuri ibalopo (Mendelson ati Pfaus, 1989). Lakotan, o han pe aarin, kii ṣe agbeegbe, awọn olugba dopamine dẹrọ idahun erectile, nitori awọn ere ti o waye nipasẹ apomorphine ti iṣakoso eto ti dina nipasẹ haloperidol (antagonist dopamine ti n ṣiṣẹ ni aarin) ṣugbọn kii ṣe domperidone (antagonist dopamine ti nṣiṣe lọwọ agbegbe) ninu awọn eku (Rampin ati al., Ọdun 2003) ati ninu eku (Pehek et al., 1988a).

Lakoko ti ọpọlọpọ awọn agbegbe ọpọlọ ṣe orchestrate lati ṣe ilana awọn ihuwasi ibalopọ, agbegbe kan ni pataki, agbegbe agbedemeji preoptic (mPOA) jẹ agbegbe ọpọlọ ti a ṣe iwadi lọpọlọpọ ti o jọmọ ilana ihuwasi ibalopọ ọkunrin ni gbogbo awọn ẹya vertebrate (Hull ati Dominguez, 2015). Itọkasi yii jẹ idalare, bi mPOA ṣe gba igbewọle aiṣe-taara lati gbogbo awọn ọna ifarako (Nikan ati Swanson, ọdun 1986) ati firanṣẹ awọn asọtẹlẹ si awọn ẹya ti o ṣe pataki fun ibẹrẹ ati ilana ti iṣakojọpọ (Nikan ati Swanson, ọdun 1988). Nọmba awọn neurotransmitters ati awọn homonu ni ipa lori iṣẹ ibalopọ nipasẹ ṣiṣe ni agbegbe yii (Hull et al., 1994; Dominguez ati Hull, ọdun 2005; Dominguez ati al., Ọdun 2006; Hull ati Dominguez, 2006; Dominguez, ọdun 2009; Kleitz-Nelson ati al., 2010a,b). Awọn ijinlẹ ablation jẹrisi ipa kan fun agbegbe yii ni ilana awọn ihuwasi ibalopo; awọn egbo nibi pataki ṣe ipalara ọpọlọpọ awọn abala ihuwasi (Hull ati Dominguez, 2015). Lọna miiran, imudara itanna ti mPOA ninu awọn eku dinku nọmba awọn intromissions ti o nilo fun ejaculation, akoko ti o ṣaju ejaculation, ati aarin aarin postejaculatory (Malsbury, ọdun 1971; Rodríguez-Manzo et al., 2000). Imudara ti mPOA tun gbejade awọn idasile ati ifasilẹ urethrogenital, awoṣe fun orgasm (Marson ati McKenna, ọdun 1994; Giuliano et al., Ọdun 1997).

Kii ṣe iyalẹnu, iṣẹ-ibalopo tun ṣe alekun iṣẹ ṣiṣe ti ara ni mPOA. Fun apẹẹrẹ, awọn gbigbasilẹ elekitirojioloji ninu mPOA ti awọn obo ti o ni iriri ibalopọ ṣe afihan iṣẹ ṣiṣe ti o pọ si mejeeji nigbati awọn ẹranko ba tẹ lati mu obinrin kan pato sunmọ ati paapaa lakoko iṣakojọpọ, lakoko ti iṣẹ ṣiṣe duro lẹhin ejaculation (Oomura ati al., 1988). Awọn adanwo miiran, ni lilo awọn igbasilẹ elekitirokisioloji ti o jọra ninu awọn eku tun fihan pe ibarasun n fa iṣẹ ṣiṣe pọ si ni mPOA (Shimura et al., 1994). Awọn data ajẹsara ṣe digi awọn abajade elekitirojioloji. Fos-immunoreactivity (ir), ti a lo bi iwọn iṣẹ ṣiṣe cellular, pọ si ninu mPOA lẹhin ti awọn ọkunrin ba farahan si oorun ti obinrin ti o ni itara (Bressler ati Baum, ọdun 1996; Pfaus ati Heeb, ọdun 1997; Tobiansky et al., ọdun 2012). Nigbati o ba ṣe afiwe Fos-ir ninu mPOA ti awọn ẹranko ti n ṣakojọpọ, la awọn iṣakoso, iye ti o pọ si ti iṣakojọpọ jẹ ki awọn oye ti Fos-ir ti n pọ si ni mPOA ti awọn eku akọ (Robertson et al., 1991; Baum ati Everitt, ọdun 1992; Veening ati Coolen, ọdun 1998; Nutsch et al., 2014).

Boya mPOA tun ṣe atunṣe awọn iyipada ihuwasi ti o waye lati iriri ibalopo ko tun han patapata. Sibẹsibẹ, ọpọlọpọ awọn ijinlẹ daba pe mPOA wa ni o kere ju apakan ninu awọn iyipada iriri iriri. Wo, fun apẹẹrẹ, awọn ijinlẹ wọnyi ti o sopọ mọ iriri ibalopọ pẹlu awọn ayipada ninu mPOA: iriri ibalopọ ni ipa iṣẹ ṣiṣe ti ibarasun ninu awọn sẹẹli ti o ni nitric oxide synthase ninu mPOA ti awọn eku ọkunrin (Nutsch et al., 2014); Nọmba awọn astrocytes ninu mPOA ni ibamu ni odi pẹlu lairi si ejaculate ni ailagbara ibalopọ ṣugbọn kii ṣe awọn eku akọ ti o ni iriri (Will et al., 2015); iriri ibalopọ pọ si amuaradagba olugba oxytocin ati ikosile pupọ ninu mPOA ti awọn eku ọkunrin (Gil et al., Ọdun 2011); imudara iriri ti ihuwasi ibalopọ ọkunrin jẹ awọn olugba dopamine D1 ati phosphorylation ti dopamine- ati phosphoprotein-AMP-ilana cyclic-32 ninu mPOA ti awọn eku ọkunrin (McHenry ati al., Ọdun 2012); iriri ibalopo pọ si awọn olugba androgen ninu mPOA ti awọn eku ọkunrin (Swaney et al., Ọdun 2012); iriri ibalopo pọ si nitric oxide synthase ninu mPOA ti awọn eku akọ. Nibi a fojusi lori isunmọ ifasilẹ ibarasun ti D2-receptor ti o ni awọn sẹẹli, ati boya iwuri yii ni ipa nipasẹ iriri ibalopo.

Fi fun isọpọ mPOA ati ipa aarin ninu ilana ti ihuwasi ibalopọ ọkunrin, o le ma jẹ iyalẹnu pe dopamine dẹrọ iṣẹ ṣiṣe ibalopọ nipasẹ ṣiṣe ni agbegbe yii (Dominguez ati Hull, ọdun 2005). Awọn orisun ti dopamine si mPOA pẹlu awọn sẹẹli ti n ṣe dopamine ni arin agbeegbe (A14; Moore ati Lookingland, ọdun 1995), rostral zona incerta (A13; Björklund et al., 1975), ati (o kere ju ninu awọn eku abo) tun agbegbe ventral tegmental (A10; Miller ati Lonstein, ọdun 2009). Awọn ẹkọ ti n gba awọn ọgbẹ yiyan, microinjections, tabi awọn imọ-ẹrọ microdialysis ṣe afẹyinti ọna asopọ isunmọ laarin iṣẹ ṣiṣe dopamine ninu mPOA ati iṣẹ ibalopọ pọ si ninu awọn ọkunrin. Ṣe akiyesi pe awọn ọgbẹ 6-OHDA ti awọn okun dopamine ni mPOA, ọsẹ 1 ṣaaju idanwo, ni idapo pẹlu idinku nla ti iṣelọpọ dopamine ni A14 yorisi awọn ejaculations diẹ, awọn latencies ejaculation gigun ati awọn aaye arin lẹhin-ejaculatory to gun (PEI; Bitran ati al., ọdun 1988). Awọn abẹrẹ microinjections ti awọn antagonists dopamine ni ipa iparẹ deede. Awọn abẹrẹ microinjections ti cis-flupenthixol sinu mPOA abajade ni awọn eku diẹ ti o ṣajọpọ, ati awọn ti o ṣajọpọ ṣe aṣeyọri awọn ejaculations diẹ (Pehek et al., 1988b). Awọn abẹrẹ microinjections ti awọn antagonists dopamine tun ṣe ailagbara awọn ifasilẹ penile, pataki microinjections ti cis-flupenthixol dinku awọn ifasilẹ penile ex copula. Lọna miiran, microinjections ti dopamine agonists mu ihuwasi. Awọn microinjections Apomorphine ṣe alekun nọmba awọn ejaculations ati dinku akoko ti o nilo lati ṣaṣeyọri ejaculation ati akoko ti o lo ni PEI (Hull et al., 1986). Apomorphine microinjections sinu mPOA tun dinku lairi si ifasilẹ penile akọkọ ati mu nọmba awọn okó pọ si ni idanwo akoko kan (Pehek et al., 1989), fifihan idahun penile imudara ti o tẹle itunra olugba dopamine ninu mPOA.

Nikẹhin, awọn idanwo microdialysis ṣe afihan itusilẹ ti dopamine pọ si ni mPOA ti awọn eku ni atẹle ifihan iṣaaju si obinrin estrous ati lakoko iṣakojọpọ (Hull ati Dominguez, 2015). Ẹri siwaju sii pe dopamine ninu mPOA ṣe alabapin si iwuri ibalopọ, kii ṣe itara gbogbogbo lasan, ni a pese nipasẹ Kleitz-Nelson et al. (2010a,b) lílo àparò ara Japan, tí ó ṣàfihàn ìlànà àkópọ̀ ìgbà kúrú ju àwọn eku lọ tí wọn kò sì ní ẹ̀yà ara tí kò ní ìfaradà. Awọn ijinlẹ wọnyi fihan pe awọn ipele ti dopamine pọ si niwaju obinrin kan, ti o pada si ipilẹṣẹ lẹhin yiyọ obinrin naa; sibẹsibẹ, awọn àparò ti o kuna lati dapọ ko ṣe afihan itusilẹ ti o pọ si (Kleitz-Nelson ati al., 2010b). Lọna miiran, awọn ọkunrin ti o ṣe afihan ilosoke pupọ ni dopamine lakoko awọn ibaraenisepo precopulatory lẹhin idena ti o ni imurasilẹ pẹlu awọn obinrin lẹhin yiyọkuro rẹ (Kleitz-Nelson ati al., 2010a).

Lakoko ti iṣaju ti ẹri ṣe atilẹyin ipa ilana pataki fun dopamine ati awọn olugba rẹ ni mPOA, boya awọn ipele oriṣiriṣi ti iṣẹ ṣiṣe ibalopo tabi iriri ibalopọ ni iyatọ ti o mu dopamine-receptor ti o ni awọn sẹẹli ninu mPOA jẹ aimọ titi di isisiyi. Ni ipari yii, a lo awọn igbelewọn ajẹsara lati pinnu boya awọn ipele oriṣiriṣi ti iṣẹ ṣiṣe ibalopo tabi iriri ni ipa nọmba awọn sẹẹli ti o ni awọn olugba D2-bi dopamine, Fos, tabi mejeeji ninu mPOA ti awọn eku ọkunrin.

Awon nkan ise nkan ati awon ona lati se nkan

Awọn koko

Ọgọta Long – Evans awọn eku ọkunrin (Harlan, Indianapolis, IN; ọjọ 90 ni dide) ni a gbe si ọkọọkan ninu awọn ẹyẹ ṣiṣu nla, ninu yara iṣakoso afefe, lori ina 14:10 h/iwọn dudu, pẹlu awọn ina ni pipa ni 10 :00 owurọ ati/lori ni 8:00 pm Ounje ati omi wa larọwọto. Awọn obinrin pataki (n = 17) jẹ ovariectomized labẹ ketamine hydrochloride (50 mg/kg) ati xylazine hydrochloride (4 mg/kg) akuniloorun. Wọn mu wa sinu estrus ihuwasi pẹlu 4 μg estradiol benzoate (sc) 48 h ṣaaju, ati 400 μg (sc) progesterone 4 wakati ṣaaju idanwo. Gbigbawọle ihuwasi jẹ timo nipa gbigbe obinrin si pẹlu akọ okunrinlada ni kete ṣaaju idanwo naa bẹrẹ. Gbogbo awọn ilana ni a ṣe ni ibamu pẹlu Awọn ile-iṣẹ Awọn Itọsọna Ilera ti Orilẹ-ede fun Lilo Awọn Ẹranko ati pe a fọwọsi nipasẹ Igbimọ Itọju Ẹranko ati Igbimọ Lilo ni University of Texas ni Austin.

Awọn eku ọkunrin ni a yan laileto si ọkan ninu awọn ipo mẹrin wọnyi: awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ, ṣugbọn wọn ko ni ibatan ni ọjọ ẹbọ (ti o ni iriri ṣugbọn ko si ibalopọ, Exp-NoSex); eranko ti o ni iriri ibalopọ ati ki o tun mated ni ọjọ ẹbọ (iriri ati ibalopo, Exp-Sex); eranko ti o wà ibalopo rọrun ati ki o ko tọkọtaya lori awọn ọjọ ti ẹbọ (inexperienced ati ki o ko ibalopo, Inexp-NoSex); awọn ẹranko ti o jẹ alaigbọran ibalopọ ṣugbọn ti o ni iriri ibarasun fun igba akọkọ ni ọjọ ẹbọ (aini iriri ati ibalopo, Inexp-Sex).

Iriri ibalopọ jẹ ibarasun pẹlu obinrin ti o gba ibalopọ fun awọn iṣẹju 90, ni gbogbo ọjọ miiran, fun awọn ọjọ 6 ṣaaju ọjọ ẹbọ, fun apapọ 9 h. Ni ọjọ 6th, a ṣe akiyesi awọn ẹranko lati jẹrisi pe wọn ṣaṣeyọri o kere ju meji ejaculations lakoko igba iriri ipari. Awọn ẹranko mẹta ti ko pade ipele yii ni a yọkuro lati idanwo siwaju. Ọjọ meji niya ọjọ iriri ti o kẹhin ati ọjọ idanwo, nigbati a fi ẹran rubọ. Awọn data ihuwasi ti gba ati itupalẹ ni ọjọ idanwo, eyiti o jẹ awọn ọjọ 2 lẹhin igba iriri ipari. Awọn ẹranko ti o wa ninu awọn ẹgbẹ mated ni a gba laaye lati ṣajọpọ si ejaculation kan. Awọn ẹranko ti o kuna lati dapọ lẹhin awọn wakati 1 ni a yọkuro ati yọkuro lati itupalẹ siwaju. Ko si-ibalopo idari won lököökan, ṣugbọn obinrin ti won ko ṣe sinu ile wọn agọ ẹyẹ. Gbogbo ẹranko ni a fi rubọ pẹlu iwọn apọju ti sodium pentobarbital (100 mg / kg), 1 wakati lẹhin ejaculation tabi opin idanwo.

Immunohistochemistry

Awọn eku ti wa ni perfused transcardially pẹlu iyọ labẹ akuniloorun pentobarbital, atẹle nipa 4% paraformaldehyde ni 0.1 M phosphate buffer (PB; pH = 7.35). A yọ awọn ọpọlọ kuro, fi sii lẹhin wakati 1 ni imuduro kanna ni iwọn otutu yara, ati fipamọ sinu 30% sucrose ni 4°C. A ge awọn apakan Coronal ni 35 μm ati ti o fipamọ sinu ojutu cryoprotectant. Awọn apakan ti o ni awọn mPOA ni aibikita imunohistochemical fun Fos ati awọn olugba D2 dopamine. Awọn fifọ ni PB, 4 × fun iṣẹju 5, ṣaju gbogbo awọn incubations. Awọn abala ti o gba awọn idawọle wọnyi: 1% H₂O₂ ni PB, ati lẹhinna dina ni 2% deede ewurẹ omi ara ati 1% Tween-20 (ojutu idilọwọ); mouse anti Fos jc antibody (1:5000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) ni idinamọ ojutu, moju ni yara otutu. Ni ọjọ keji, awọn apakan ti wa ni idawọle ni anti-eku biotinylated secondary antibody (1:500 ni ojutu idilọwọ; Vector Labs, Burlingame, CA, USA). Immerorease ti wa ni ibamu pẹlu pẹlu ajinde ọkà diamiogen ojutu (Sigma, St. Louis, Mo, aceple) lati mu iṣapẹẹrẹ dudu ti o pẹ to 10 iṣẹju. Lẹhin fifọ daradara pẹlu PB, awọn apakan ti wa ni idapọ pẹlu ehoro anti-D2 antibody akọkọ ati ojutu idinamọ, ni alẹ ni otutu yara (1: 6000; EMD Millipore, Billerica, MA, USA). Ni ọjọ keji, idawọle ni egboogi-ehoro biotinylated secondary antibody (1: 500 ni ojutu idilọwọ; Vector Labs, Burlingame, CA, USA) ṣaju avidin-biotin conjugate, ati pe a fi oju rẹ han pẹlu ojutu chromogen DAB laisi nickel, ti nso brown ojoro. Awọn apakan ti gbẹ, ti a fi sori ẹrọ, ati ni wiwa pẹlu DPX (VWR, Radnor, PA, USA). Fun awọn iṣakoso odi, awọn apakan lo ilana imunostaining kanna, ayafi D2, Fos, tabi awọn apo-ara akọkọ mejeeji ni a yọkuro. Nigbati o ba n ṣafihan ati yiyọ àsopọ lati awọn incubations, awọn adanwo ṣọra lati dinku akoko gbigbe ti o yapa akọkọ ati ti o kẹhin ti àsopọ, akoko gbigbe ni aropin 40 s fun gbogbo awọn incubations pẹlu DAB.

Mikroscopy ina ni a lo lati ṣe iwọn nọmba awọn sẹẹli ti o ni D2-ir, Fos-ir, ati awọn sẹẹli aami-meji. A ṣe ayẹwo mPOA ni ọna meji ati awọn sẹẹli ajẹsara ti a ka ni agbegbe 300 × 400 μm ni aarin preoptic aarin (MPN), aarin aarin ni mPOA. Awọn iṣiro ni a ṣe pẹlu ọwọ nipa lilo ImageJ. A ti ge awọn ọpọlọ ni 35 μm si awọn apakan dogba mẹrin. A ṣe atupale àsopọ lati ọkan ninu awọn apakan wọnyi, nitorinaa 105 μm wa ti o yapa ege kọọkan. Awọn iṣiro sẹẹli jẹ aropin kọja awọn igun-aye mejeeji ati kọja awọn apakan mẹfa naa. Awọn apakan mẹfa fun ẹranko kọọkan ni a ka ni ẹyọkan, ni ibamu si awọn ipoidojuko lati Swanson (2004).

Western Immunoblotting

Fun immunohistochemistry, a ni abawọn nipa lilo olugba polyclonal anti-D2 dopamine ehoro kan. Apejuwe ti olupese ti antibody D2 sọ pe o ṣe idanimọ olugba D2 ninu awọn eku, ko ṣe atunṣe pẹlu awọn olugba dopamine miiran, ati ṣafihan ifasilẹ-agbelebu iwonba pẹlu fọọmu kukuru (D2Sh) ti olugba. Eyi ṣe pataki lati ṣe akiyesi nitori pe, lakoko ti D2Sh wa ni akọkọ ni iṣaaju-synaptically (rẹ. autoreceptor), D2Lh gigun-fọọmu ṣiṣẹ diẹ sii bi olugba post-synapti kilasika, ati awọn iwọn wa ti awọn sẹẹli ti o ni D2 kii ṣe awọn okun. Ni afikun, iwọn asọtẹlẹ ti D2 jẹ isunmọ 50 kDa. Bibẹẹkọ, awọn adanwo ajẹsara ajẹsara ti olupese ti ara rẹ nipa lilo antibody D2 yii ṣe awari awọn ẹgbẹ meji ni ~ 48 ati ~ 51 kDa. Awọn idanwo ajẹsara ajẹsara nipa lilo awọn aporo D2 miiran tun ṣe ijabọ awọn ẹgbẹ kọja 50 kDa (Farooqui et al., 1992; Sakata ati al., 1992; Boundy et al., 1993). Fun idi eyi, a ṣe awọn adanwo immunoblotting ti Iwọ-oorun lati ṣe idanwo pato ti antibody D2.

Fun immunoblotting ti Iwọ-oorun, awọn ayẹwo ọpọlọ jẹ isokan ati mimọ ni ifipamọ RIPA (Pierce) pẹlu awọn tabulẹti inhibitor protease (Roche), ati pe akoonu amuaradagba ni ifoju nipa lilo eto NanoDrop kan. Iwọn fifuye amuaradagba 10 μg ti yapa nipasẹ electrophoresis ati ni akawe ni lilo awọn iṣedede aibikita PrecisionPlus (BioRad). Gẹgẹbi awọn iṣakoso rere, awọn ayẹwo ọpọlọ ni a gba lati awọn agbegbe ti a mọ lati ni ifọkansi giga ti awọn olugba D2, eyun dorsal striatum (DS) ati kotesi ẹhin (CTX; Lidow et al., 1989; Meador-Woodruff ati al., 1989); Awọn iṣakoso odi pẹlu awọn ayẹwo ti a gba lati ẹdọ (LIV) ati kidinrin (KID). Awọn ayẹwo ni a gbe lọ si PVDF ati ti o farahan si anti-D2 antibody ehoro (1:4000, Millipore) ati lẹhinna ewurẹ egboogi-ehoro HRP Atẹle (1:30,000, Bio-Rad) ni idaduro idinamọ ti o ni 2% omi ara ewurẹ deede. Awọn ẹgbẹ ni wiwo ni lilo ECL chemiluminescence. Awọn abajade jẹrisi wiwa ẹgbẹ kan ni ~ 50 kDa, sibẹsibẹ a rii awọn ẹgbẹ afikun ti o kọja 50 kDa (wo Nọmba 1). Lati isisiyi lọ a ṣe apẹrẹ abawọn imuno-rere D2 ninu awọn adanwo wa bi itọkasi ti awọn olugba D2-bi dopamine putative.

Iṣiro data

Ayẹwo ọna meji ti iyatọ (ANOVA; iriri mating ×) ni a ṣe lati ṣawari fun awọn iyatọ ninu nọmba awọn sẹẹli ajẹsara-rere. Bakannaa, Welch meji ayẹwo t-Awọn idanwo ni a lo lati ṣe iwadii fun awọn iyatọ ninu awọn igbese ihuwasi. Awọn itupalẹ data ni a ṣe pẹlu R (ẹya 3.2.2).

awọn esi

Ọna meji ANOVA ṣe afihan ipa akọkọ pataki ti ibalopo lori nọmba awọn sẹẹli Fos-rere ninu mPOA (F_(1,40) = 178.915, p <0.001), nipa eyiti awọn ẹranko ti o ni ibalopọ ṣaaju irubọ ni awọn sẹẹli Fos-ir pupọ diẹ sii. Sibẹsibẹ, ko si ipa akọkọ ti iriri (F_(1,40) = 0.800, p = 0.376), bẹni ko si ibalopọ nipasẹ ibaraenisepo iriri (F_(1,40) = 0.562, p = 0.4579; Nọmba 2A). A ooru map depicting awọn ibasepọ laarin awọn nọmba ti Fos-rere ẹyin ati ibalopo ihuwasi ti wa ni gbekalẹ ninu Figure 3A.

Ọna meji ANOVA ṣafihan ipa akọkọ pataki ti iriri lori nọmba awọn sẹẹli D2-ir putative ninu mPOA (F_(1,40) = 7.417, p <0.01) nipa eyiti awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ ni awọn sẹẹli D2-ir pupọ diẹ sii laibikita iṣẹ-ibalopo ṣaaju irubọ (iriri, 167 ± 3.9; ti ko ni iriri 148 ± 2.3; wo Nọmba 2B). Sibẹsibẹ, ko si ipa akọkọ ti ibalopo (F_(1,40) = 2.564, p = 0.117), bẹni ko si ibalopọ nipasẹ ibaraenisepo iriri (F_(1,40) = 0.119, p = 0.732; Nọmba 3B). A ooru map depicting awọn ibasepọ laarin awọn iye ti D2-ir ẹyin ati ibalopo ihuwasi ti wa ni gbekalẹ ninu Figure 3B.

ANOVA ọna meji ṣe afihan ipa akọkọ pataki ti ibalopo lori ida ọgọrun ti awọn sẹẹli D2-ir ninu mPOA ti o ṣafihan Fos (F_(1,40) = 162.831, p <0.001), ṣugbọn kii ṣe ipa akọkọ ti iriri (F_(1,40)= 0.324, p = 0.572). Sibẹsibẹ, ibalopọ pataki kan wa nipasẹ ibaraenisọrọ iriri (F_(1,40) = 4.390, p <0.05). Ibaṣepọ ibaraenisepo pataki yii ṣe afihan awọn ẹranko alailabo ibalopọ ti o ṣajọpọ fun igba akọkọ ni ida kan ti o ga pupọ ti awọn sẹẹli rere-D2 ti o ṣafihan Fos ni akawe si awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ, wo Nọmba 2C. Bibẹẹkọ, ko si iyatọ nla ninu ida ti awọn sẹẹli rere-D2 ti o ṣafihan Fos laarin aibikita ibalopọ ati awọn ẹranko ti o ni iriri ti ko dapọ ṣaaju irubọ. Lakotan, laisi iriri, awọn ẹranko ti o ni ibalopọ ṣaaju ki o to rubọ ni awọn sẹẹli D2-ir pupọ diẹ sii ti o ṣafihan Fos ju awọn ẹranko ti ko ṣajọpọ (Figure). 3C). Maapu ooru kan ti n ṣe afihan ibatan laarin ida ti awọn sẹẹli D2-ir ti o ṣafihan Fos ati ihuwasi ibalopọ ni a gbekalẹ ni Nọmba 3C.

Awọn itupalẹ ida ọgọrun ti awọn sẹẹli Fos-rere laisi awọn olugba bii D2, ni lilo ọna meji ANOVA, ṣafihan ipa akọkọ ti ibalopo (F_(1,42) = 15.795, p <0.001), nibiti ida ogorun awọn sẹẹli Fos ti ko ni D2 ti ga julọ ninu awọn ẹranko ti ko ṣajọpọ ṣaaju ki wọn to rubọ. Wo Figure 4 fun awọn micrographs aṣoju. Awọn atẹle ni ipin ogorun awọn sẹẹli Fos-rere ti ko ni D2 (tumọ si ± SEM): naive/ko-ibalopo, 11.45 ± 1.4; òwú / ibalopo, 7.98 ± 0.8; ti o ni iriri / ko si ibalopo, 13.04 ± 1.4; kari / ibalopo , 6.51 ± 1.0.

Lati le rii daju pe awọn iyipada ninu imunoreactivity jẹ pato si mPOA, nọmba awọn sẹẹli ajẹsara fun Fos ati D2 tun ṣe ayẹwo ni ẹgbẹ diagonal ti Broca, agbegbe ti a rii ni ipele anteroposterior kanna bi mPOA. Awọn itupalẹ ṣe afihan ko si awọn iyatọ pataki ninu nọmba D2-ir, Fos-ir, tabi awọn sẹẹli ti o ni awọ laarin eyikeyi ninu awọn ẹgbẹ mẹrin. Ni pato, nọmba awọn sẹẹli D2-ir jẹ bi atẹle fun ẹgbẹ kọọkan (tumọ si ± SEM): Exp-Ko si Ibalopo, 105 ± 3.08; Exp-Ibalopo, 104 ± 4.62; Naïve-Ko si ibalopo, 118 ± 5.46; Naïve-ibalopo, 112 ± 6.01. Nọmba awọn sẹẹli Fos-ir jẹ bi atẹle fun ẹgbẹ kọọkan (tumọ si ± SEM): Exp-Ko si Ibalopo, 1.5 ± 0.7; Exp-Ibalopo, 2.7 ± 0.6; Naïve-Ko si ibalopo, 1.5 ± 0.58; Naïve-Ibalopo, 3.9 ± 0.6. Nọmba awọn sẹẹli ti o ni awọn mejeeji D2 ati Fos jẹ bi atẹle fun ẹgbẹ kọọkan (Itumọ ± SEM): Exp-Ko si Ibalopo, 1.3 ± 0.60; Exp-Ibalopo, 1.85 ± 0.36; Naïve-Ko si ibalopo, 1.3 ± 0.56; Naïve-Ibalopo, 2.5 ± 0.48.

Awọn igbese ihuwasi ti gbekalẹ nibi ni Tabili 1. Ni ibamu pẹlu awọn awari iṣaaju, awọn ẹranko ti o ni iriri ni awọn lairi kukuru lati gbe, intromit, ati ejaculate. Ìrírí ìbálòpọ̀ kò ní ipa lórí àgbékalẹ̀ tàbí ìtúbọ̀ intromission.

fanfa

Awọn ijinlẹ fihan pe awọn agonists dopamine microinjected sinu mPOA dẹrọ ihuwasi ibalopọ, lakoko ti awọn microinjections ti awọn antagonists dopamine ṣe ibajẹ iṣakojọpọ, awọn isọdọtun abo, ati iwuri ibalopo (Hull ati Dominguez, 2015). Pẹlupẹlu, awọn ipele dopamine pọ si ni mPOA lakoko ifihan iṣaju iṣaju si obinrin estrous ati lakoko iṣakojọpọ (Hull ati Dominguez, 2015). Ni ibamu pẹlu awọn ijinlẹ miiran, a fihan pe ibarasun pọ si Fos ni mPOA ti awọn eku ọkunrin (Hull ati Dominguez, 2015). A tun fihan pe iriri iriri ibalopọ ṣe iranlọwọ fun ihuwasi ibalopo ni awọn ọkunrin, bi a ṣe wọn nipasẹ awọn latencies ti o dinku lati bẹrẹ ibarasun ati ṣaṣeyọri ejaculation. Eyi, paapaa, ni ibamu pẹlu awọn ẹkọ iṣaaju. A jẹ akọkọ lati fihan pe ibarasun pọ si Fos ni awọn sẹẹli ti o ni D2 ninu mPOA ati pẹlupẹlu, pe iwuri yii jẹ igbẹkẹle iriri. A tun rii pe iriri ibalopọ leralera pọ si nọmba awọn sẹẹli ti o ni D2-bi ajẹsara-ajẹsara. O yanilenu, nọmba awọn sẹẹli Fos ti ko ni D2 ga julọ ninu awọn ẹranko ti ko ni idapọ ṣaaju ki wọn to rubọ, ṣe atilẹyin pataki ti dopamine-receptor ti o ni awọn sẹẹli fun ibarasun, bi iṣakojọpọ ṣe iwuri pupọ julọ awọn sẹẹli ti o ni D2. Nikẹhin, a rii awọn ibamu laarin nọmba awọn sẹẹli Fos-ir ati awọn intromissions, D2-ir ati lairi oke, ati ogorun Fos/D2 ati awọn intromissions, gẹgẹbi iṣẹ ti iriri.

Awọn abajade wa fihan pe ibarasun awọn sẹẹli ti o ni itara ti o ni awọn olugba D2-bi ninu mPOA. Ni gbogbogbo, imuṣiṣẹ ti awọn olugba ni idile D1 (D1 ati D5) ti awọn olugba ṣe iwuri adenylyl cyclase, lakoko ti awọn ti o wa ninu idile D2 (D2, D3, ati D4) ṣe idiwọ dida cAMP nipa didi adenylate cyclase enzymuSibley ati Monsma, 1992; Gingrich ati Caron, ọdun 1993). Nitoribẹẹ, yiya sọtọ awọn ifunni kan pato ti D1 vs. D2 ninu mPOA si ikosile ti ihuwasi ibalopọ ọkunrin di pataki. Ati pe lakoko ti a ko ṣe ayewo taara imuṣiṣẹ ti awọn olugba D1, o yẹ ki a fẹ lati ṣe akiyesi pataki ti awọn awari wa lori ipa ti D1/D2 ninu mPOA lori ihuwasi ibalopọ. Awoṣe Hull ti ipa dopaminergic lori ibalopo (Dominguez ati Hull, ọdun 2005) ṣe afihan pe imudara ti D1 ati awọn olugba D2 ninu mPOA le ni diẹ ninu amuṣiṣẹpọ ati diẹ ninu awọn ipa ihuwasi ilodi si.

Imudara ti awọn olugba D1 pọ si nọmba ti awọn ere copula ex ṣugbọn dinku nọmba awọn itujade seminal; Lọna miiran antagonist D1 kan ni ipa idakeji, dinku awọn ere ati awọn itujade seminal ti o pọ si (Hull et al., 1992). Nitorinaa, imudara ti awọn olugba bii D1 le pese “engine” fun awọn okó. Ninu iwadi kanna, iwọn kekere ti apomorphine pọ si awọn ere, ati pe ipa yii ti dina ni kikun nipasẹ D1 antagonist SCH-23390 ati dina apakan nipasẹ D2 antagonist raclopride, ni iyanju pe awọn iru olugba mejeeji ṣe alabapin si awọn ipa apomorphine, ṣugbọn pe olugba D1 je diẹ munadoko. Ni apa keji, iwọn lilo giga ti apomorphine pọ si awọn itujade seminal, ati pe ipa yii ti dina nipasẹ D2 antagonist raclopride ati imudara diẹ nipasẹ D1 antagonist SCH-23390 (Markowski ati al., 1994), ni iyanju pe imudara ti o lagbara ti awọn olugba D2-bi le yi iwọntunwọnsi autonomic pada lati ṣe ojurere itujade seminal ati idinamọ okó. Nitorinaa, awọn olugba D1 ati D2 ninu mPOA ni awọn iloro oriṣiriṣi ti imuṣiṣẹ ati awọn ipa oriṣiriṣi lori iṣakoso autonomic ti awọn isọdọtun abo. Ni ipari, awọn abẹrẹ microinjections ti THP sinu mPOA dẹrọ iṣakojọpọ (Markowski ati al., 1994), lakoko ti iwọn lilo giga ti D2 agonist quinelorane ṣe idaduro ibẹrẹ ati fa fifalẹ oṣuwọn idapọ lakoko ti o dinku nọmba awọn intromissions ti o nilo lati ṣe okunfa ejaculation kan (Hull et al., 1989). Nitorinaa, amuṣiṣẹpọ laarin awọn olugba D1 ati D2 ninu mPOA waye, ni imuṣiṣẹ ti awọn olugba D2 le nilo lati disinhibit awọn ere, eyiti lẹhinna mu ṣiṣẹ nipasẹ iwuri ti awọn olugba D1 nipasẹ awọn ipele kekere si iwọntunwọnsi ti dopamine. Ni idakeji, itara lile tabi diẹ sii gigun ti awọn olugba D2 le yi iwọntunwọnsi autonomic pada lati ṣe ojurere awọn ejaculations. Ni ibamu si awoṣe yii ọna ẹrọ ti o ga julọ, ti a mu ṣiṣẹ nipasẹ imudara ti awọn olugba D2, ṣe iranlọwọ awọn itujade seminal ati idinamọ erections (rẹ. imuṣiṣẹ aanu); ti o ba jẹ otitọ, lẹhinna awọn abajade wa ni ila pẹlu awoṣe yii. Iwọnyi tun wa ni ibamu pẹlu awọn awoṣe ẹranko miiran, gẹgẹbi awọn àparò Japanese, nibiti awọn ifọwọyi D1 ati D2 ni awọn ipa iyatọ lori ifẹ ati ihuwasi imudara (Balthazart ati al., Ọdun 1997). Ejaculations ninu iwadi wa ni nkan ṣe pẹlu imudara ti o pọ si ti awọn sẹẹli ti o ni D2, bi a ti jẹri nipasẹ wiwa Fos ninu awọn sẹẹli ti o ni D2. Eyi jẹ, lẹẹkansi, ni ibamu pẹlu awoṣe Hull, ninu eyiti imudara dopaminergic ti o lagbara ti awọn sẹẹli ti o ni olugba D2 ti ṣaju awọn ejaculations. Awọn abajade wa tun fihan pe awọn ẹranko ti ko ni iriri ibalopọ ni imuṣiṣẹ ti o tobi ju ti awọn sẹẹli ti o ni D2, ni iyanju pe awọn ẹranko wọnyi nilo imudara mejeeji ti awọn olugba D2-bi lati dẹrọ disinhibition ti awọn isọdọtun abo ati pe o tun nilo iwuri nla ti awọn sẹẹli ti o ni D2 lati ṣaṣeyọri awọn ejaculations. Eyi paapaa ni ibamu pẹlu awoṣe Hull.

Fọọmu kukuru ati gigun ti olugba D2 yatọ ni iwọn ati iṣẹ (Moreira ati al., Ọdun 2010). Nibi a ṣe ayẹwo fọọmu gigun D2, eyiti o ṣiṣẹ ni akọkọ awọn ifiweranṣẹ. Sibẹsibẹ, a ko ṣe ayẹwo iṣẹ ti awọn olugba D1. Bibẹẹkọ, iṣọpọ ti awọn olugba D2 pẹlu Fos ni imọran diẹ ninu ilowosi ti awọn olugba D1 nitori imuṣiṣẹ yii yoo aigbekele nilo imudara D1. Awọn ohun iwuri bii kokeni, d-amphetamine, ati methamphetamine gbejade awọn ilọsiwaju nla ni awọn ipele Fos striatal (Graybiel et al., 1990; Carney ati al., ọdun 1991; Young et al., 1991), ti o nfihan pe dopamine pọ si pọ si ikosile c-fos. Ilọsi yii, sibẹsibẹ, jẹ idinamọ nipasẹ yiyan awọn alatako olugba D1-igbasilẹ (Young et al., 1991). Awọn ijinlẹ miiran, sibẹsibẹ, ṣe afihan awọn ipa ibaraenisepo ti D1 ati awọn olugba D2 lori ikosile Fos, bi ninu habenula ita (Wirtshafter ati Krebs, ọdun 1997). Wirtshafter ati Krebs itasi awọn eku pẹlu ọpọlọpọ awọn iwọn lilo ti D2 agonist quinpirole ti o yan boya nikan tabi ni apapo pẹlu ọpọlọpọ awọn iwọn lilo ti yiyan D1 agonist A-77636. Ni ẹyọkan, awọn agonists yiyan fa awọn ilọsiwaju kekere ni Fos-ir, ṣugbọn awọn akojọpọ awọn oogun meji yorisi ilosoke to lagbara (Wirtshafter ati Krebs, ọdun 1997), n ṣe afihan isọdọkan pataki laarin awọn olugba D1 ati D2 (Gerfen et al., 1995; Keefe ati Gerfen, ọdun 1995). Niwọn igba ti ikosile c-Fos ti o pọ si ni nkan ṣe pẹlu depolarization, imudara ti c-Fos ni awọn sẹẹli ti o ni D2 lẹhin ibarasun, bi a ṣe han nibi, ṣe afẹyinti imọran pe D1 ati D2 ninu mPOA ni awọn ipa amuṣiṣẹpọ lori iṣakojọpọ. Eyun, ibẹrẹ ti ibarasun ṣe iwuri olugba D1 nipasẹ kekere si awọn ipele iwọntunwọnsi ti dopamine, eyiti o tẹle lẹhin itunra lile tabi gigun diẹ sii ti awọn olugba D2, yiyi iwọntunwọnsi autonomic lati ṣe ojurere awọn ejaculations.

Nipa iriri ibalopo, a fihan pe ibarasun nfa awọn sẹẹli ti o ni awọn olugba D2 putative ninu mPOA ati pe imudara yii tobi julọ ninu mPOA ti awọn ọkunrin ti ko ni iriri tẹlẹ ti o gba ipade ibalopo akọkọ wọn. Wiwa yii jẹ akiyesi nitori awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ ṣe afihan iṣẹ ṣiṣe ibalopọ ti o pọ si, bi a ti jẹri nipasẹ ilosoke ninu igbohunsafẹfẹ ejaculation ati idinku awọn lairi, nigbati a bawe si awọn ọkunrin ti ko ni iriri (Hull ati Dominguez, 2015). Iyatọ yii ni imuṣiṣẹ ti D2 le ṣe ipa ninu awọn iyatọ ihuwasi ti o farada laarin awọn ẹranko ti o ni iriri ati ti ko ni iriri. Ni pato, ọkan le ṣe akiyesi pe awọn sẹẹli ti o ni imọlara-dopamine nilo itara diẹ sii pẹlu iriri ti o tun ati igba pipẹ, bi a ti jẹri nipasẹ isọdi kekere ninu awọn ẹranko ti ko ni iriri lasiko ninu iwadi wa. Nikẹhin, a tun ṣe awari nọmba nla ti awọn sẹẹli D2-ir putative ninu awọn ẹranko ti o ni iriri. Iyipada yii ni ibamu pẹlu awọn ihuwasi ibalopọ. Awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ nilo akoko diẹ lati pilẹṣẹ ibarasun, gẹgẹbi ẹri nipasẹ lairi oke. Lairi yii ni odi ni ibamu pẹlu nọmba awọn sẹẹli D2-ir, afipamo pe akoko diẹ sii ti o nilo ṣaaju ibarasun, dinku nọmba D2-ir. Eyi ni imọran pe iriri ibalopọ pọ si awọn ipele ti D2, eyiti o ni nkan ṣe pẹlu idinku idinku si mate. Awọn igbese ihuwasi ti o gbẹkẹle iriri miiran ni ibamu pẹlu Fos-ir. Nọmba awọn sẹẹli Fos-ir daadaa ni ibamu pẹlu nọmba awọn intromissions ninu awọn ẹranko ti ko ni iriri, ni iyanju pe awọn ẹranko ti ko ni iriri ibalopọ nilo itara nla ti mPOA lati ṣaṣeyọri awọn ejaculation, bi awọn ẹranko wọnyi ti ṣepọ si ejaculation kan ṣoṣo. Ni idakeji, imudara ti o tun ṣe ti o waye lati awọn intromissions diẹ sii le ti yorisi iṣẹ-ṣiṣe ti o pọju ninu mPOA. Nikẹhin, Nọmba awọn sẹẹli D2 ti o ni awọn Fos daadaa ni ibamu pẹlu nọmba awọn intromissions, lẹẹkansi ni awọn ẹranko ti ko ni iriri ibalopọ. Bi pẹlu Fos, eyi le ni alaye ọna meji. Ni eyun, awọn ẹranko ti ko ni iriri ibalopọ nilo itara nla ti awọn sẹẹli ti o ni D2 lati ṣaṣeyọri ejaculations, ati ni idakeji ifihan gigun si dopamine ti o waye lati awọn intromissions nla le ti yori si iṣẹ ṣiṣe ti o tobi julọ ninu mPOA.

Ni ipari, a fihan pe iriri ibalopọ ṣe irọrun ihuwasi ibalopo ati pe awọn iyipada wọnyi ni awọn ibaramu ihuwasi ninu mPOA. Ni eyun, awọn sẹẹli ti o ni awọn olugba D2-bii dopamine ti a ṣepọ pẹlu Fos. Yi colocalization wà ga ni eranko ibarasun fun igba akọkọ. Awọn ẹranko ti o ni iriri ibalopọ tun ni diẹ sii D2-bii awọn olugba dopamine ninu mPOA wọn. Awọn ibatan nkankikan wọnyi ati neuroplasticity ti o ni ibatan le ṣe akọọlẹ, o kere ju ni apakan, fun awọn iyipada ihuwasi ti o tẹle iriri ibalopọ ninu awọn eku ọkunrin.